Vet. Res. 33 (2002) 653-660
DOI: 10.1051/vetres:2002046

In situ hybridization for the detection of the apxIV gene in the lungs of pigs experimentally infected with twelve Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes

Wan-Seob Cho, Changsun Choi and Chanhee Chae

Department of Veterinary Pathology, College of Veterinary Medicine and School of Agricultural Biotechnology, Seoul National University, Suwon 441-744, Kyounggi Do, Republic of Korea
(Received 6 December 2001; accepted 25 March 2002)

Abstract
The detection of the apxIV gene in lung tissues from pigs experimentally infected with the 12 major A. pleuropneumoniae serotype (1 to 12) reference strains was studied by in situ hybridization using a non-radioactive digoxigenin-labeled DNA probe. In situ hybridization produced a distinct positive signal in all pigs inoculated with the 12 A. pleuropneumoniae serotypes. Positive hybridization typically exhibited a dark-brown to black reaction product in intracellular and extracellular locations, without background staining. A strong hybridization signal was seen in degenerated alveolar leukocytes ("oat cells") adjacent to the foci of coagulative necrosis and in the alveolar spaces. The in situ hybridization methodology developed for the detection of the apxIV gene is a valuable tool for the diagnosis of porcine pleuropneumonia caused by A. pleuropneumoniae when only formalin-fixed tissues are submitted for diagnosis.

Résumé
Détection par hybridation in situ du gène apxIV dans les poumons de porcs infectés expérimentalement par douze sérotypes de Actinobacillus pleuropneumoniae. La détection du gène apxIV dans les tissus pulmonaires de porcs infectés expérimentalement par les douze sérotypes majeurs des souches de référence (1 à 12) de Actinobacillus pleuropneumoniae a été effectuée par hybridation in situ utilisant une sonde à ADN non radioactive marquée à la digoxigénine. L'hybridation in situ a produit un signal positif distinct chez tous les porcs inoculés par les douze sérotypes de A. pleuropneumoniae. Un résultat positif d'hybridation entraînait typiquement un produit de réaction marron foncé à noir localisé en intra- et en extra-cellulaire, sans bruit de fond. Un signal fort d'hybridation a été observé dans les leucocytes alvéolaires dégénérés adjacents aux foyers de nécrose et dans les espaces alvéolaires. La méthode d'hybridation in situ développée pour la détection du gène apxIV est un outil précieux pour le diagnostic de la pleuropneumonie porcine causée par A. pleuropneumoniae lorsque seuls les tissus fixés dans le formol sont soumis pour le diagnostic.

Key words: Actinobacillus pleuropneumoniae / Apx toxin / in situ hybridization / lung / pig

Mots clés : Actinobacillus pleuropneumoniae / Apx toxine / hybridation in situ / poumon / porc

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