Vet. Res. 33 (2002) 159-168
DOI: 10.1051/vetres:2002004

Use of a serum-free medium to produce in vitro Neospora caninum and Toxoplasma gondii tachyzoites on Vero cells

François De Meerschman^a, Chantal Rettigner^a, Charles Focant^a, Raphael Boreux^a, Christian Pinset^b, Thierry Leclipteux^a and Bertrand Lossona<sup>a

a</sup>  Laboratory of Parasitology and Pathology of Parasitic diseases, Faculty of Veterinary Medicine, University of Liege, Bd de Colonster, 20, Building 43a, B-4000 Sart-Tilman, Liège, Belgium
^b  Laboratoire de développement cellulaire, Institut Pasteur, rue du docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France

(Received 4 May 2001; accepted 18 September 2001)

Abstract
Neospora caninum and Toxoplasma gondii are cyst-forming coccidian parasites of human and veterinary clinical relevance. In vitro cultivation of the protozoans using Vero cells is usually performed in order to produce antigenic materials. Quantitative and qualitative comparisons of Vero cells grown in RPMI medium supplemented either with foetal calf serum (FCS), horse serum (HS) or a specific serum-free additive (DefCell) were performed. A serum-free cell culture system used to propagate N. caninum (NC-1 isolate) and T. gondii tachyzoites (Rh stain) were compared with the other two cell culture systems. FCS supplemented media was found to be more effective than the others in promoting Vero cells and N. caninum tachyzoites. However, it was found unable to support adequate T. gondii tachyzoite proliferation. Vero cells, T. gondii and N. caninum tachyzoite production gave similar growth patterns with either HS or DefCell supplemented media. Defcell was considered as a good alternative to supplement culture medium.

Résumé
Utilisation d'un milieu sans sérum pour la production in vitro de tachyzoites de Neospora caninum et Toxoplasma gondii sur cellules Vero. Neospora caninum et Toxoplasma gondii sont deux sporozoaires présentant un intérêt en médecine humaine et vétérinaire. La culture in vitro utilisant, entre autres, les cellules Vero comme support de la multiplication des deux parasites, est généralement employée en vue de l'obtention de tachyzoïtes. Au cours de cette étude, une évaluation quantitative et qualitative de la production de cellules Vero dans un milieu complémenté en sérum de veau foetal, de cheval ou bien avec un additif (DefCell) exempt de sérum, a été réalisée. Les trois types de milieu de culture ont également été employés et comparés dans le cadre de la production sur cellules Vero de tachyzoïtes de T. gondii (souche RH) et de N. caninum (isolat NC-1). Le milieu complémenté en sérum de veau foetal s'est révélé être le plus adéquat pour la croissance de cellules Vero et la production de tachyzoïtes de N. caninum. Cependant, ce milieu s'est avéré incapable d'assurer une production optimale de tachyzoïtes de T. gondii. La production de cellules Vero, ainsi que de tachyzoïtes de T. gondii et de N. caninum, a présenté des caractéristiques communes en milieu complémenté en sérum de cheval et en DefCell. Ce dernier s'est révélé être une bonne alternative au sérum de veau foetal et de cheval pour complémenter les milieux de culture. L'absence de protéines animales dans ce milieu présente un certain nombre d'avantages qui sont discutés.

Key words: Neospora caninum / Toxoplasma gondii / cell culture / serum-free medium

Mots clés : Neospora caninum / Toxoplasma gondii / cellules Vero / milieu exempt de sérum

Correspondence and reprints: François DE Meerschman Tel.: (32) 43664098; fax: (32) 43664097;
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