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Vet. Res.
Volume 31, Number 4, July-August 2000
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| Page(s) | 373 - 395 | |
| DOI | https://doi.org/10.1051/vetres:2000100 | |
| How to cite this article | Vet. Res. (2000) 373-395 | |
DOI: 10.1051/vetres:2000100
Vet. Res. 31 (2000) 373-395
Guidelines and recommendations for antimicrobial minimum inhibitory concentration (MIC) testing against veterinary mycoplasma species
Peter C.T. Hannan
Mycoplasma Experience Ltd, 1 Norbury Road, Reigate, Surrey, RH2 9BY, UK
(
Abstract:
The absence of standardised procedures for minimum inhibitory concentration (MIC) testing of
antimicrobial agents against veterinary mycoplasma and ureaplasma species (Mollicutes) has
made it difficult to compare results originating from different laboratories. This report,
prepared on behalf of the International Research Programme on Comparative Mycoplasmology
(IRPCM), offers guidelines and recommendations for veterinary MIC testing of these organisms
in an effort to rectify this problem. The subjects discussed include suitable media for broth
and agar MIC assays, storage and preparation of antimicrobial agents, standardisation of
mycoplasma inocula for MIC tests, validation of equipment, incubation conditions, and
determination of MIC end points. A standard medium for all veterinary mycoplasma MIC tests
cannot currently be recommended, owing to the diversity of nutritional requirements of
different mycoplasma species. Instead mycoplasma broths or agars giving optimal growth of
specific mycoplasmas or ureaplasmas are recommended, as sub-optimal growth may lead to
falsely low MIC results. The importance of using standardised mycoplasma inocula, for assays
using either solid or liquid media is stressed. The growth phase may be less important as
lag phase and logarithmic phase cultures of Mycoplasma gallisepticum, M. synoviae,
M. bovis and M. hyopneumoniae have given very similar results in liquid MIC assays. The
liquid method of Tanner and Wu and the agar method described by Hannan et al. are compared
and described in detail. Methods for calculating MIC50s and MIC90s are described and the
interpretation of results discussed. Methods for assessing mycoplasmacidal (MMC) activity
of antimicrobial agents are also described. Adoption of these guidelines should lead to
more consistent MIC results being obtained between laboratories.
Keywords:
MIC / mycoplasmacidal / antibiotic / mycoplasma / ureaplasma
Résumé:
Instructions et recommandations pour les tests de concentration minimum inhibitrice
(CMI) d'antimicrobiens contre les mycoplasmes en médecine vétérinaire. L'absence de
procédures standardisées pour le test de concentration minimum inhibitrice (CMI) d'agents
antimicrobiens contre les mycoplasmes et uréaplasmes (Mollicutes) présents chez les animaux,
rend difficile la comparaison des résultats provenant de différents laboratoires. Ce
document, préparé pour le Programme International de Recherche sur la Mycoplasmologie
Comparative (IRPCM), offre des instructions et des recommandations pour les tests
d'intérêt vétérinaire de CMI de ces organismes, afin de résoudre ce problème. Les milieux
appropriés pour les tests de CMI en milieu liquide et sur gel d'agar, le stockage et la
préparation des agents antimicrobiens, la standardisation des inoculums pour les tests,
la validation des équipements, les conditions d'incubation, et la détermination des valeurs
critiques de CMI, sont les sujets abordés dans ce document. Un milieu standard pour le test
de CMI de tous les mycoplasmes d'intérêt vétérinaire ne peut pour le moment pas être
recommandé, à cause de la diversité des besoins nutritionnels des différentes espèces de
mycoplasmes. Au contraire, des milieux liquides ou sur gel d'agar permettant d'obtenir
une croissance optimale spécifique des différentes espèces de mycoplasmes et d'uréaplasmes
sont recommandés, une croissance sub-optimale pouvant donner lieu à des résultats de CMI
faussement basses. L'importance de l'utilisation d'inoculums standardisés de mycoplasmes
dans des tests en milieu liquide ou solide, est soulignée. La phase de croissance peut
être moins importante, les phases de latence et de croissance exponentielle des cultures
Mycoplasma gallisepticum, M. synoviae, M. bovis et M. hyopneumoniae ayant donné des
résultats très similaires lors de test CMI en milieu liquide. La méthode en milieu liquide
de Tanner et Wu, et la méthode sur agar décrite par Hannan et al. sont comparées et décrites
en détail. Des méthodes pour le calcul des CMI50 et CMI90 sont décrites, et
l'interprétation des résultats est discutée. Des méthodes pour évaluer l'activité
mycoplasmacidale des agents antimicrobiens sont aussi décrites. L'adoption de ces
instructions devrait permettre d'obtenir des résultats de CMI plus cohérents entre
différents laboratoires.
Mots clé :
CMI / mycoplasmacidal / antibiotique / mycoplasme / uréaplasme
Correspondence and reprints: Peter C.T. Hannan
tel.: 44 (0) 1737 226662; fax: 44 (0) 1737 224751;
e-mail: mexp@mycoplasma-exp.com
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