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All issues Volume 31 / No 2 (March-April 2000) Vet. Res., 31 2 (2000) 229-239 Abstract
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Issue
Vet. Res.
Volume 31, Number 2, March-April 2000
Page(s) 229 - 239
DOI https://doi.org/10.1051/vetres:2000118
How to cite this article Vet. Res. (2000) 229-239
DOI: 10.1051/vetres:2000118

Vet. Res. 31 (2000) 229-239

Purification and characterisation of bovine WC1+ γδT lymphocytes from peripheral blood

Youssef Fikria - Jean Nyabendaa - Martine Denisb - Paul-Pierre Pastoretc

aUnité d'immunologie cellulaire, Institut Pasteur de Bruxelles, Rue Engeland 642, 1180 Bruxelles, Belgium
bSmithKline Beecham Biologicals, Rue de l'Institut 89, 1330 Rixensart, Belgium
cDépartement d'Immunologie et de Vaccinologie, Faculté de Médecine Vétérinaire, Université de Liège, Sart Tilman, 4000 Liège, Belgium

(Received 10 June 1999; accepted 12 November 1999)

Abstract:

In order to isolate and characterise resting WC1+ $\gamma\delta$ T cells from cattle, we developed a protocol for purifying these cells by negative selection from peripheral blood. The purification method included five steps: separation of mononuclear cells on lymphoprep, depletion of monocytes by adherence to plasma-coated gelatin, enriching T cells on a nylon wool column, depleting CD2+ T cells by sheep red blood cells (SRBC), and finally depleting CD4+ and CD8+ T cells by the magnetic cell sorting technique (MACS). This procedure proved efficient and reproducible, and the purity of the isolated WC1+ $\gamma\delta$ T cells was more than 97% as analysed by flow cytometry (FACS). Cytokines and costimulatory molecules mRNA expression was assessed by the reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) technique in freshly isolated resting WC1+ T cells. We found that purified uncultured WC1+ T cells express TNF-$\alpha$, CD28, CTLA-4 and IL-2R$\alpha$ mRNA transcripts but do not express those for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 and IFN-$\gamma$. The expression of CD28 and CTLA-4 transcripts on bovine WC1+ T cells indicates that these genes are evolutionarily conserved.


Keywords: antigen / cytokine mRNA expression / $\gamma\delta$ T lymphocyte

Résumé:

Purification et caractérisation des cellules bovines T $\gamma\delta$ WC1+ du sang périphérique. Afin de purifier et de caractériser les cellules T $\gamma\delta$ du type WC1+ d'origine bovine, nousavons développé un protocole de purification par sélection négative de ces cellules contenues dans le sang périphérique. La méthode de purification comporte cinq étapes, à savoir : laséparation des cellules mononucléés sur lymphoprep, la déplétion des monocytes par adhérence sur de la gélatine couverte de plasma, l'enrichissement des cellules T sur colonne de nylon, la déplétion des cellules T du type CD2+ par formation des rosettes avec les globules rouge du mouton, et enfin la déplétion des cellules T CD4+ et CD8+ par la technique de "Magnetic cell sorting'' (MACS). Le procédé s'est révéléefficace et reproductible, tandis que la pureté des cellules isolées analysées par cytométrie de flux, s'élevait à plus de 97 %. Sur les cellules fraîchement isolées, nous avons étudié au moyen de la technique de "reverse transcriptase polymerase chain reaction'' (RT-PCR) l'expression de l'ARN messager des cytokines et des molécules de costimulation. Nous avons ainsi mis en évidence que les cellules T $\gamma\delta$ WC1+ fraîchement isolées, non cultivées, expriment les ARNm du TNF-$\alpha$, du CD28, du CTLA-4 et de IL-2R$\alpha$ tandis que les ARNm de l'IL-2, l'IL-4, l'IL-6, l'IL-10 et de l'IFN-$\gamma$ n'étaient pas exprimés. L'expression du CD28 et du CTLA-4 sur les cellules T $\gamma\delta$WC1+ indiquerait que ces gènes ont été conservés durant l'évolution.


Mots clé : antigène / expression ARNm cytokine / lymphocyte T $\gamma\delta$

Correspondence and reprints: Youssef Fikri
Tel.: (32) 2 373 32 55; fax: (32) 2 373 31 74; jnyabend@ben.vub.ac.be

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