Vet. Res. 33 (2002) 397-404
DOI: 10.1051/vetres:2002025

Dot-enzyme linked immunosorbent assay as an alternative technique for the detection of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) antibodies

Helena Gallicchio Domingues, Jacqueline Campalans, Renata Servan Almeida, Lia Treptow Coswig and Clarice Weis Arns

Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, 13081-970 Campinas, SP, Brazil

(Received 3 April 2001; accepted 4 March 2002)

Abstract
A dot-ELISA test for the detection of anti-BRSV antibodies is described. The objective of this study was the standardisation of a test as a fast, inexpensive and effective alternative to detect anti-BRSV antibodies. Its sensitivity, specificity and usefulness were compared to a commercial ELISA-kit and to the standard serum neutralisation (SN) test. The standardisation of the technique was done using nitrocellulose disks soaked with a viral sample isolated in Brazil, BRSV-25-BR. The best results were obtained when the disks were sensitised with a purified antigen at a concentration of 0.7  g/disk and the bovine serum was diluted 1 : 200. The experiment used 423 samples of bovine serum collected in the main cattle breeding centres in Brazil. The standard SN, dot-ELISA technique and commercial ELISA kits scored 67.8%, 71.8% and 72.3% of the samples as positive, respectively. When compared to the SN test, the standardised dot-ELISA and the commercial ELISA tests presented relative sensitivities of 92.3% and 91.6% and relative specificities of 71.3% and 68.4% respectively. The results demonstrated that the dot-ELISA test is adequate for the objectives proposed by this study, being easy to use and economically viable. Thus, this test represents an alternative for BRSV serological diagnosis in the substitution of SN and commercial ELISA tests, recommendable for utilisation in laboratories with few resources.

Résumé
Technique immunoenzymatique (dot-ELISA) pour détecter les anticorps contre le virus syncytial respiratoire bovin . Cette étude décrit un test immunoenzymatique (dot-ELISA) pour la détection des anticorps contre le virus syncytial respiratoire bovin (anti-BRSV). Le but de ce travail est de standardiser une technique peu coûteuse et précise pour la détection des anticorps anti-BRSV. La sensibilité, la spécificité et l'utilité du test dot-ELISA ont été vérifiées et comparées à celles d'un kit commercial ELISA et du test de référence de séroneutralization (SN). La standardisation de la technique a été réalisée sur disque de nitrocellulose imprégnée de l'échantillon BRSV-25-BR, isolé au Brésil. Les résultats ont été obtenus avec un disque sensibilisé par l'antigène purifié à la concentration de 0,7  g de protéine purifiée et le sérum bovin à la dilution de 1 : 200. Des échantillons (423) de sérum obtenus dans les principaux centres d'élevage de bovins au Brésil ont été utilisés. Des résultats positifs ont été obtenus dans 67,8 % des échantillons par SN, 71,8 % par dot-ELISA et 72,3 % par le kit ELISA commercial. Par comparaison aux tests de SN, les tests dot-ELISA et kit ELISA commercial ont présenté des sensibilités relatives de 92,3 % et 91,6 % et des spécificités relatives de 71,3 % et 68,4 % respectivement. Les résultats montrent que le test dot-ELISA standardisé est approprié au but de cette étude, étant très facile à utiliser, économique et adaptable aux conditions brésiliennes. Ainsi ce test constitue une alternative aux tests de SN et ELISA commercial pour le diagnostic sérologique du BRSV. On peut donc conseiller l'utilisation de ce test pour le diagnostic de BRSV dans les laboratoires dépourvus d'appareils sophistiqués.

Key words: bovine respiratory syncytial virus / dot-ELISA / commercial ELISA kit / serological analysis / Brazil

Mots clés : virus syncytial respiratoire bovin / dot-ELISA / ELISA commercial / test sérologique / Brésil

Correspondence and reprints: Clarice Weis Arns Tel.: (55) 19 37886258; fax: (55) 19 37886276; arns@obelix.unicamp.br

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