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Issue
Vet. Res.
Volume 32, Number 6, November-December 2001
Page(s) 601 - 609
DOI http://dx.doi.org/10.1051/vetres:2001103
How to cite this article Vet. Res. (2001) 601-609
DOI: 10.1051/vetres:2001103

Vet. Res. 32 (2001) 601-609

Detection of monokines in paraffin-embedded tissues of pigs using polyclonal antibodies

Francisco Javier Salguero, Tigest Mekonnen, Eduardo Ruiz-Villamor, Pedro José Sánchez-Cordón and José Carlos Gómez-Villamandos

Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Veterinaria, Edificio de Sanidad Animal, Campus Universitario de Rabanales, Universidad de Córdoba, Córdoba 14014, Spain

(Received 4 January 2001; accepted 23 July 2001)

Abstract
Monokines are glycoproteins, synthesised by macrophages, which exert various effects on the organism. The most important monokines are interleukin (IL)-1$\alpha$, IL-1$\beta$, tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$ and IL-6. This paper reports on immunohistochemical techniques developed for the detection of IL-$\alpha$, IL-1$\beta$, IL-6 and TNF-$\alpha$ in fixed and paraffin-embedded pig tissues (spleen, lymph nodes, thymus, liver and kidney). Different fixatives (buffered formalin, acetic formalin, paraformadehyde-lysine-periodate and Bouin solution), and antigen unmasking techniques (permeabilisation with Tween 20, pronase enzymatic digestion and microwave-citrate buffer) were used. We describe different protocols for detection of monokines using polyclonal antibodies against the studied monokines. No signal was obtained with monoclonal antibodies against pig-TNF-$\alpha$ and human IL-1$\alpha$. Bouin solution was shown to be the best fixative for immunohistochemical detection of IL-1$\alpha$, TNF-$\alpha$, and IL-6, using permeabilisation with Tween 20 as an unmasking antigen method. Acetic formalin was shown to be the best fixative for IL-1$\beta$ detection, not needing antigen retrieval techniques. Macrophages were identified as the main cytokine-producing cells, although other types of cells also stained positively to some cytokines. These techniques represent valuable tools for studies of the pathogenesis of viral and bacterial diseases, and of the immune system of the pigs.

Résumé
Détection de monokines dans des tissus de porc fixés dans la paraffine en utilisant des anticorps polyclonaux. Les monokines sont des glycoprotéines synthétisées par les macrophages, qui exercent différents effets sur l'organisme. Les monokines les plus importantes sont l'interleukine (IL)-1$\alpha$, l'IL-1$\beta$, le facteur de nécrose tumorale (TNF)-$\alpha$ et l'IL-6. Ce travail rapporte des techniques immunohistochimiques permettant la détection de monokines dans les tissus du porc fixés dans la paraffine (rate, nodule lymphatique, thymus, foie et rein). Différents fixateurs (formol tamponné, formol acétique, paraformaldéhyde-lysine-periodate et la solution de Bouin), et des techniques pour démasquer les antigènes (perméabilisation avec le Tween 20, digestion enzymatique avec la pronase et micro-onde avec tampon citrate) ont été utilisées. Nous avons élaboré des protocoles différents pour chaque anticorps polyclonal. Aucun signal n'a été obtenu avec les anticorps monoclonaux contre le TNF-$\alpha$ du porc et l'IL-1$\alpha$ humaine. La solution de Bouin s'est révélée être le meilleur fixateur pour la détection immunohistochimique d'IL-1$\alpha$, TNF-$\alpha$ et IL-6, en utilisant la perméabilisation avec le Tween 20 comme méthode pour démasquer l'antigène. Le formol acétique s'est révélé être le meilleur fixateur pour l'IL-1$\beta$, ne nécessitant pas de techniques de récupération de l'antigène. Les macrophages ont été identifiés comme les principales cellules produisant des cytokines, bien que d'autres types cellulaires se soient aussi révélés positifs pour quelques cytokines. Ces techniques représentent un outil précieux pour étudier la pathogénie des maladies virales et bactériennes du porc et son système immunitaire.


Key words: pig / cytokine / polyclonal antibody / macrophage

Mots clés : porc / monokine / anticorps polyclonal / macrophage

Correspondence and reprints: José Carlos Gómez-Villamandos Tel.: (34) 957 218162; fax: (34) 957 218847;
    e-mail: jcgomez@uco.es

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